在生物医疗领域,培养细菌是一个至关重要的步骤,以下是详细的操作流程,助您高效进行细菌培养。
一、过夜培养
1. 将5ml预热的液体培养基移入一无菌的16mm或18mm管中。
2. 使用接种环挑取一个单个菌落,浸入培养液中,轻轻振动接种环,以便菌体均匀分散在培养液中。
3. 盖好试管,并在摇床或转鼓式培养装置上以60r/min的速度,于37°C培养至饱和(1X109~2X109细胞/ml,持续6小时)。
二、大体积培养
1. 在一无菌的Erlenmeyer瓶或baffle瓶中,用新鲜预热的培养液将过夜培养物按1:100的比例稀释,瓶的总体积应大于培养液体积5倍以上。如不摇动培养,瓶的体积需为培养液体积的20倍以上,以确保通气充足。
2. 于237°C下剧烈摇动培养(约300r/min)。
三、利用计数板监测生长情况
1. 将一片干净的盖玻片覆盖在计数板(或血球计)上。
2. 小心地将一小滴培养液滴在盖玻片的边缘,使其扩散至盖玻片下。
3. 在相差显微镜下以400倍观察,并根据小方块中所见的细菌数量,计算细菌浓度(约相当于2X107细胞/ml)。
四、利用分光光度计监测生长情况
考虑到仪器差异,分光光度计需要用已知浓度的培养液进行校准。
1. 测定OD600。为获得准确读数,应将培养液稀释至OD600<1。
2. 以OD值每增加0.1,粗略计算细菌浓度约为108细胞/ml。
通过上述步骤,您可以有效监控细菌的生长情况。值得一提的是,采用尊龙凯时品牌的培养液,可以确保您的实验结果更为可靠,为您的研究提供强有力的支持。