尊龙凯时的人胚肺成纤维细胞MRC5培养指南提供了详细的细胞培养及处理信息。以下是培养细胞的必要条件和步骤，以确保培养的成功及细胞的活性。

一、细胞培养条件

- **细胞名称**：人胚肺成纤维细胞MRC5
- **生长特性**：贴壁生长
- **冻存条件**：无血清冻存液（货号：C7001）
- **培养体系**：MEM培养基 + 10% FBS + 1% NEAA + 1%丙酮酸钠 + 1% L-谷氨酰胺 + 1% P
- **传代方法**：首次建议以 1:2 的比例进行传代
- **传代说明**：每2天换液。建议用无菌离心管收集培养基以供过渡对比使用。如对比效果不佳，推荐直接使用尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，应在培养至良好状态后，用完全培养液填满细胞瓶并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。在处理前，用75%酒精对细胞瓶进行消毒，确保在超净台内进行严格的无菌操作。细胞瓶应放置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，然后进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片进行保存（建议分别拍摄40x, 100x, 200x）。前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片则默认细胞状态良好。建议传代时，一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，并在换液后松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞未超过80%汇合度，将培养液收集至离心管中，保留5ml培养基在37℃、5% CO2环境中培养。若细胞密度超过80%，即可进行传代，具体步骤如下：1. 弃去培养上清液，用无钙镁PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶，置于37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞状态；当细胞大部分变圆并脱落时，迅速进行操作，加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使之完全脱落，吸出悬液，转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，并加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 依比例1:2进行分瓶传代（分为两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后转入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次；
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶，观察细胞状态，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打后转移到15ml离心管中，1000rpm离心5分钟；
3. 弃上清后，将细胞沉淀重新加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接存放于-80℃冰箱，若需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中，解冻至无结晶，再用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟；
3. 弃上清，加入5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃, 5% CO2细胞培养箱中培养；
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能因贴壁不牢而脱落。这是正常现象。如脱落较多，可将所有培养液收集至离心管中，进行1000rpm离心5分钟。收集上清液做过渡培养，并沉淀后加入胰酶1-2ml轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再离心、弃上清后，重悬于1-2ml完全培养基中，按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃, 5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1. 关于细胞出现问题可重发的情况：
- 细胞运输途中如遇到细胞丢失、瓶身破损、严重漏液等情况，均可重发；
- 如收到后48小时内发现细胞污染，提供真实实验结果核实后可重发；
- 常温发货或干冰冻存发货的细胞，若复苏后24小时内未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片）可申请重发等。
2. 不予重发的情况包括：
- 细胞曝光污染、客户操作不当导致细胞状态不佳、使用非本库推荐的培养体系等。

为确保获得优质的人胚肺成纤维细胞MRC5，请遵循尊龙凯时的培养规范及售后政策。如需更多详细信息，欢迎联系我们的技术支持团队。